Препарат № 114. Нервные клетки сетчатки глаза лошади (рис. 118)
На тотальном препарате сетчатки, в противоположность срезам, отростки нервной клетки видны на большом протяжении и можно проследить их ход и характер ветвления.
Для изучения нервных клеток ганглиозного слоя сетчатки лучше взять глаз только что убитой лошади. Разрезают глазное
Рис. 118. Нервные клетки сетчатки глаза лошади (увеличение - ок. 7, об. 40):
1 - тело нервной клетки, 2 -дендриты, 3 - нейрит, 4 - варикозные утолщения дендритов
яблоко по экватору на переднюю и заднюю половины. Держа заднюю половину глаза местом разреза кверху, осторожно сливают в плоский широкий сосуд стекловидное тело так, чтобы сетчатка оказалась наверху. Это сделать нетрудно, так как сетчатка непосредственно примыкает к стекловидному телу и очень легко отщепляется от прилегающей к ней снизу сосудистой оболочки. Перерезать ножницами сетчатку требуется только в области отхождения зрительного нерва, так как здесь она плотно
199
соединена с глазным яблоком. Если сетчатка почему-либо при выливании стекловидного тела не отойдет от сосудистой оболочки, надо пинцетом поддеть ее за край, осторожно отделить от сосудистой оболочки и поместить на поверхность стекловидного тела. Если сетчатка попадет под стекловидное тело, ее необходимо осторожно переместить на его поверхность. Стекловидное тело, на поверхности которого находится сетчатка, не дает ей высохнуть.
Пипеткой или стеклянной палочкой капают на поверхность сетчатки 0,1%-ный раствор метиленового синего, приготовленный на физиологическом растворе поваренной соли. Окрашивание производят в течение 20-30 мин при температуре 37°. Для этого плоский сосуд со стекловидным телом и сетчаткой накрывают крышкой и помещают в термостат. Рекомендуется все время следить за тем, чтобы поверхность сетчатки была влажной; для этого ее время от времени смачивают раствором метиленового синего. Степень окраски проверяют под микроскопом, помещая под малое увеличение целиком весь сосуд со стекловидным телом и сетчаткой. Окрашивание следует, прекратить тогда, когда станут ясно видны синие разветвленные клетки, лежащие на светлом фоне. Очень важно не пропустить момента наилучшей видимости клеток. Если препарат окрашен недостаточно, клетки видны плохо, если же он перекрашен, то, кроме нервных клеток, окрасятся и различные другие клетки сетчатки, которые будут маскировать нервные.
Метиленовая синь легко растворима в воде и в спиртах.и может вымыться из препарата, поэтому после окрашивания препарата краситель необходимо закрепить. Для этого сливают всю жидкость и поверхность сетчатки поливают 7%-ным раствором молибденовокислого аммония. Затем осторожно удаляют шпателем или пинцетом стекловидное тело. Несколько раз меняют указанный раствор и оставляют в нем объект на ночь. Утром промывают в дистиллированной воде, чтобы удалить кристаллы аммония, нарезают сетчатку на куски и обезвоживают в абсолютном спирте, также несколько раз сменяя его. Минуя карбол-ксилол, обрабатываемый кусочек помещают в чистый ксилол и заключают в бальзам (окрашенная сторона сетчатки должна быть направлена кверху).
Подобный же препарат можно получить, используя глаз более доступного объекта - например морской свинки. Для этого необходимо в кровеносные сосуды животного произвести инъекцию метиленового синего, приготовленного на физиологическом растворе (1/4%-ный или 1/6 %-ный). Предварительно промывают сосудистую систему физиологическим раствором. Описание методики инъекции можно найти в любом руководстве по микроскопической технике.
200
Через полчаса после инъекции вылущивают глазные яблоки из глазниц и совершенно так же, как это было описано для глаза лошади, получают стекловидное тело, на поверхности которого расположена сетчатка. Стекловидное тело с сетчаткой помещают во влажную камеру и наблюдают при малом увеличении микроскопа. Сначала вся сетчатка имеет темно-синюю диффузную окраску, но постепенно фон бледнеет и на светлом фоне выделяются синие клетки. Когда клетки становятся видны достаточно отчетливо, сетчатку обрабатывают, как уже описано, 7%-ным раствором молибденовокислого аммония и приготовляют препарат.
Следует отметить, что нервные клетки сетчатки можно импрегнировать серебром по методу Лавдовского-Гольджи.
По общему виду нервные клетки сетчатки глаза лошади и морской свинки мало отличаются друг от друга.
Клетки диффузно окрашены в синий цвет, лишь иногда бывает заметно более темное ядро. От тела клетки отходит много отростков, поэтому она называется мультиполярной (многополюсной) в отличие от униполярных и биполярных клеток, имеющих соответственно один или два отростка.
Большое количество отростков обусловливает звездчатую форму клеток.
Несколько дендритов многократно ветвятся, образуя вокруг клетки густое нервное сплетение. Дендриты имеют широкое основание в месте отхождения от клетки, затем быстро сужаются, ветвятся и заканчиваются тончайшими нитями. Нейрит представляет собой обычно тонкий отросток, имеющий одинаковую ширину на всем своем протяжении; он не разветвляется и только изредка образует под прямым или острым углом тонкие боковые веточки - коллатерали. Часто отростки усеяны небольшими утолщениями или вздутиями, так называемыми варикозными утолщениями.
201